Synopses & Reviews
Synopsis
A levedura metilotr fica Pichia pastoris tem sido utilizada com sucesso para a express o de v rias prote nas heter logas sendo que diversos vetores j foram desenvolvidos para este sistema. Os principais vetores de express o de P. pastoris s o baseados no promotor do gene AOX1 que codifica a enzima lcool oxidase 1. Alguns estudos t m sido realizados para o uso de promotores alternativos. Em nosso laborat rio foi isolado e caracterizado o promotor do gene PGK1 de P. pastoris (PPGK1), um promotor forte e constitutivo, que representa uma alternativa promissora para a constru o de novos vetores. O objetivo deste estudo foi determinar a regi o promotora m nima do PPGK1 por meio de dele es controladas utilizando o gene da α-amilase de Bacillus subtilis como gene rep rter. Quatro dele es foram obtidas sendo que a menor (PPGK∆3), com 400 pb, manteve atividade promotora. Foi demonstrado que esta seq ncia capaz de dirigir a integra o de um vetor no genoma de P. pastoris e 51% dos clones transformantes tiveram mais de uma c pia integrada. O uso deste promotor propiciou a express o heter loga de α-amilase em altos n veis (250 U.mL-1).